植物Elisa試劑盒的特異性好,大大降低了檢測的假陽性,靈敏度高,采用靈敏的熒光檢測系統(tǒng)對熒光信號進行實時監(jiān)控,操作簡單,無PCR產(chǎn)物污染。省去了麻煩的基因序列查詢、引物探針設(shè)計、PCR擴增條件優(yōu)化等大量費時、費力、費錢的繁瑣工作。
植物Elisa試劑盒的兩種檢測模式:
交探針模式(Beacon):分子信標是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,因此標記在一端的熒光基團與標記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅,由熒光基團產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中,環(huán)一般為15-30個核苷酸長,并與目標序列互補;莖一般5-7個核苷酸長,并相互配對形成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團標記在探針的一端,而淬滅劑則標記在另一端。在復(fù)性溫度下,因為模板不存在時形成莖環(huán)結(jié)構(gòu),當加熱變性會互補配對的莖環(huán)雙鏈解開,如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對。與模板配對后,分子信標將成鏈狀而非發(fā)夾狀,使得熒光基團與淬滅劑分開。當熒光基團被激發(fā)時,因淬滅作用被解除,發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在,分子信標也是積累熒光。
植物Elisa試劑盒的通用規(guī)則:
1、要保證移液槍的準確性,過失不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M行確認。但有專業(yè)人員進行糾正。
2、要配備20ul、50ul、00ul、000ul和排槍各一支。羅致不同的液體后,要更換槍頭。即使是羅致標準品時。
3、要在實驗前小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復(fù)到室溫,以使成果更安穩(wěn)。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍羅致液體時速度不能太快,避免產(chǎn)生氣泡而使羅致量不準確。
6、羅致液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少過失。
7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體觸摸,可使槍頭上的液滴和孔壁觸摸,液滴會天然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行悄悄晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功用。