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細(xì)小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法) 使用說明書

更新時(shí)間:2022-04-07      瀏覽次數(shù):1405

細(xì)小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名:豬細(xì)小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus  (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 豬細(xì)小病毒病是由豬細(xì)小病毒Porcine Parvovirus,PPV)引起豬的繁殖障礙性疾病,其特征為受感染的母豬,特別是初產(chǎn)母豬產(chǎn)出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬,而母豬本身無明顯癥狀。

本試劑用于檢測豬血清中豬細(xì)小病毒抗體,可用于豬細(xì)小病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被豬細(xì)小病毒抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細(xì)小病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬細(xì)小病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬細(xì)小病毒抗體。

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格/96T×1

規(guī)格/96T×2

規(guī)格/96T×5

1

酶標(biāo)記物

11ml×1(紅蓋)

11ml×2(紅蓋)

26ml×2(紅蓋)

2

樣品稀釋液

50ml×1(黃蓋)

50ml×1(黃蓋)

200ml×1(黃蓋)

3

20X濃縮洗滌液

40ml×1(白蓋)

40ml×1(白蓋)

200ml×1(白蓋)

4

底物液A

6ml×1(白蓋)

11ml×1(白蓋)

26ml×1(白蓋)

5

底物液B

6ml×1(黑蓋)

11ml×1(棕蓋)

26ml×1(黑蓋)

6

終止液

6ml×1(黃蓋)

11ml×1(黃蓋)

26ml×1(黃蓋)

7

陽性對(duì)照

1.0 ml×1(紅蓋)

1.5 ml×1(紅蓋)

2.0 ml×1(紅蓋)

8

陰性對(duì)照

1.0 ml×1(綠蓋)

1.5 ml×1(綠蓋)

2.0 ml×1(綠蓋)

9

酶標(biāo)板

96T×1

96T×2

96T×5

10

蓋板膜

1

2

5

11

自封袋

1

1

2

12

說明書

1

1

1

13

稀釋板

1

2

5

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個(gè)月。

包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350 ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值,無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)0.3,陽性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)0.6。

【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】

1.樣品的OD值即ODS

2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC/(ODPC-ODNC);

SP值≥0.2,結(jié)果判定為陽性;SP值<0.2,結(jié)果判定為陰性。

3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬細(xì)小病毒抗體,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。


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